免疫組庫(Immune Repertoire,IR)是指在任何指定時間,某個個體的循環系統中所有功能多樣性B細胞和T細胞的總和。

人體淋巴細胞主要包括T細胞、B細胞。B細胞約占外周淋巴細胞總數的20%,其主要功能是產生抗體介導體液免疫應答。B細胞抗原受體((B cell receptor, BCR)是B細胞識別抗原的一種膜表面免疫球蛋白(SmIg),具有抗原結合特異性。BCR由兩條重鏈和兩條輕鏈連接而成,其中重鏈分為可變區(V區)、恒定區(C區)、跨膜區及胞質區;輕鏈則只有V區和C區。V區由VH和VL兩個結構域組成,它們各由三個互補決定區(CDR1、CDR2和CDR3)組成,CDR的氨基酸組成和排列順序呈現高度多樣性,在同一個體內,可高達109~1012,構成容量巨大的BCR庫,賦予個體識別各種抗原、產生特異性抗體的巨大潛能,這三個CDR均參與對抗原的識別,共同決定BCR的抗原特異性。

T細胞主要功能是介導細胞免疫。T細胞抗原受體(T cell receptor,TCR)是T細胞特異性識別和結合抗原肽-MHC分子的分子結構,大多數TCR由α和β肽鏈組成,少數T細胞的TCR由γ和δ肽鏈組成。每條肽鏈又可分為可變區(V區),恒定區(C區),跨膜區和胞質區等幾部分,而α和β兩條肽鏈的V區(Vα、Vβ)又各有三個高變區CDR1、CDR2、CDR3,其中以CDR3變異最大,直接決定了TCR的抗原結合特異性。TCR的CDR3由V、D、J三個基因編碼,在淋巴細胞的成熟過程中,通過V、D、J基因的重排形成了各種重組序列片段,再加上DNA堿基的SNP、Indel突變形成了T細胞的多樣性。

免疫組庫測序(Immuno-Seq)是以 T/B 淋巴細胞為研究目標,以5’RACE技術擴增決定B細胞受體(BCR)或T細胞受體(TCR)多樣性的互補決定區(CDR區),結合高通量測序技術,全面評估免疫系統的多樣性。Immuno-Seq技術可以觀察和分析T細胞和B細胞,具有較高的測序深度和特異性。在疾病監控,抗體生產,疫苗研究,健康體檢等領域有廣泛的應用。

抗體組庫服務優勢:

  1. 采用RACE技術和專門優化的PCR擴增體系與程序,降低免疫組庫中基因擴增偏向性
  2. 多樣化的NGS分析平臺
  3. 極高的成功率與快速交付速度
  4. 完備的生物信息學分析,深度挖掘高價值信息

抗體組庫應用方向:

  1. 免疫組庫或抗體組庫多樣性分析表征健康狀況
  2. 示蹤抗原特異性抗體發育過程,開發人源化抗體
  3. 評價疫苗保護性能

抗體組庫服務內容:
抗體組庫/免疫組庫測序
 

客戶提供 交付內容 發貨周期 價格
1-2 ml血液或提取的高質量RNA 1. NGS測序數據

2. 生物信息學數據分析結果

6-8周 咨詢

 
泓迅經典案例:

免疫組庫測序及生信分析

  1. 文庫構建
  2. 泓迅科技對RNA提取后經5’RACE反轉錄并擴增建庫。

  3. 文庫質檢
  4. 文庫構建完成后,我們使用 Qubit2.0 Fluorometer 進行初步定量,稀釋文庫后使用 Agilent 2100 bioanalyzer 對文庫進行insert size檢測。符合預期后,利用Q-PCR對文庫有效濃度進行準確定量(文庫有效濃度高于2nM),以確保文庫質量。

  5. 文庫測序
  6. 檢測合格后將不同文庫按照有效濃度及目標下機數據量的需求,混樣后進行 Illumina Miseq/HiSeq 測序。在flow cell 中加入四種熒光標記的 dNTP、DNA 聚合酶以及接頭引物進行擴增;在每一個測序簇延伸互補鏈時,捕獲新加入每一個dNTP后就釋放出來的對應熒光信號,并通過專業軟件將光信號轉化為測序峰,從而獲得待測片段的序列信息。

  7. 數據分析
  8. 測序數據的質量評估

    ? Per base sequence quality ? Per Sequence Quality Scores
    抗體測序生信分析服務1 抗體測序生信分析服務2
    ? Per Base Sequence Content ? Per Base GC Content
    抗體測序生信分析服務3 抗體測序生信分析服務4
    ? Per Sequence GC Content ? Per Base N Content
    抗體測序生信分析服務5 抗體測序生信分析服務6
    ? Sequence Length Distributionreads ? Duplicate Sequences
    抗體測序生信分析服務7 抗體測序生信分析服務8

 
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